Tinción de Gram
Fue desarrollada en 1884 por un científico danés Hans Christian Gram.
Desde hace varios años esta tinción es una herramienta básica y fundamental dentro del área de la microbiología.
Es considera como una tinción diferencial ya que se clasifica a las bacterias en dos grandes grupos:
- Gram positivas
- Gram negativas
Esta tinción se basa en las características de la pared celular presente en las bacterias, la cual posee propiedades diferentes y determinantes en cada microorganismo.
Esta tinción se basa en las características de la pared celular presente en las bacterias, la cual posee propiedades diferentes y determinantes en cada microorganismo.
La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por:
- Membrana celular externa
- Peptidoglicanos (capa fina)
A su vez la pared celular de las bacterias Gram positivas está conformada por:
- Peptidoglicanos
No cuenta con membrana celular externa
Así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano es la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales.
Procedimiento para realizar la tinción de Gram
Para realizar la tinción de Gram es necesario contar con los siguientes colorantes:
- Cristal Violeta
- Lugol
- Alcohol-acetona
- Safranina
- Cubrir la preparación (previamente realizada) con colorante cristal violeta por un tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
- Colocar en la preparación Lugol por el tiempo de 1 minuto, enjuagar.
- Agregar alcohol- acetona y enjuagar inmediatamente (decoloración).
- Añadir Safranina a la preparación por el tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
¿Qué sucede en la tinción de Gram?
- El cristal violeta tiene afinidad a los peptidoglicanos presente en la pared bacteriana.
- El Lugol funge el papel de mordiente (fijador de color) e impedirá la salida de cristal violeta mediante la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del péptidoglicano presente en la pared bacteriana.
- .El alcohol-acetona, se encarga de deshidratar la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa (presente en las bacterias Gram negativas), debido a que esta es soluble a la acción de disolventes orgánicos, como lo es la mezcla de alcohol-acetona. Cabe señalar que las bacterias Gram positivas, al contener una mayor cantidad de pétidoglicano en comparación a las bacterias Gram negativas, retiene con mayor fuerza el complejo (cristal violeta-yodo antes mencionado)
- La safranina es un colorante secundario o de contra tinción el cual se encarga de teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.
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