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Tinción de Gram

Fue desarrollada en 1884 por un científico danés Hans Christian Gram.

Desde hace varios años esta tinción es una herramienta básica y fundamental dentro del área de la microbiología.

Es considera como una tinción diferencial ya que se clasifica a las bacterias en dos grandes grupos:

  • Gram positivas
  • Gram negativas

Esta tinción se basa en las características de la pared celular presente en las bacterias, la cual posee propiedades diferentes y determinantes en cada microorganismo.

Esta tinción se basa en las características de la pared celular presente en las bacterias, la cual posee propiedades diferentes y determinantes en cada microorganismo.

La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por:

  • Membrana celular externa
  • Peptidoglicanos (capa fina)

A su vez la pared celular de las bacterias Gram positivas está conformada por:

  • Peptidoglicanos

No cuenta con membrana celular externa

Así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano es la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales.

Procedimiento para realizar la tinción de Gram

Para realizar la tinción de Gram es necesario contar con los siguientes colorantes:

  1. Cristal Violeta
  2. Lugol
  3. Alcohol-acetona
  4. Safranina

 

  1. Cubrir la preparación (previamente realizada) con colorante cristal violeta por un tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
  2. Colocar en la preparación Lugol por el tiempo de 1 minuto, enjuagar.
  3. Agregar alcohol- acetona y enjuagar inmediatamente (decoloración).
  4. Añadir Safranina a la preparación por el tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.

¿Qué sucede en la tinción de Gram?

  1. El cristal violeta tiene afinidad a los peptidoglicanos presente en la pared bacteriana.
  2. El Lugol funge el papel de mordiente (fijador de color) e impedirá la salida de cristal violeta mediante la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del péptidoglicano presente en la pared bacteriana.
  3. .El alcohol-acetona, se encarga de deshidratar la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa (presente en las bacterias Gram negativas), debido a que esta es soluble a la acción de disolventes orgánicos, como lo es la mezcla de alcohol-acetona. Cabe señalar que las bacterias Gram positivas, al contener una mayor cantidad de pétidoglicano en comparación a las bacterias Gram negativas, retiene con mayor fuerza el complejo (cristal violeta-yodo antes mencionado)
  4. La safranina es un colorante secundario o de contra tinción el cual se encarga de teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.
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