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Técnicas de aislamiento bacteriológico

Técnica del agotamiento de asa

En una placa con agar nutritivo y tocando con suavidad la superficie del medio, extender la muestra siguiendo el esquema de la figura

El recorrido del asa debe ser lo mas largo posible con el fin de conseguir al final del mismo células aisladas que darán lugar a colonias.

Técnica de las estrías escocesas

El procedimiento es igual al del agotamiento de asa, pero la muestra de cultivo se siembra siguiendo el esquema de la figura

Después de realizar la primera descarga se cierra la placa y se flamea al asa, sin cargarla de nuevo, se gira la placa unos 45° y arrastrando del final de las estrías realizamos la segunda fase de las mismas, se repite el procedimiento dos veces mas hasta la ultima estría que finaliza con un pequeño agotamiento en el centro de la superficie del medio cultivo.

 

Tipos de hemólisis

Muchos microorganismos son capaces de crecer en agar sangre y cuando lo hacen responden de diferente manera según realicen o no la lisis de los glóbulos rojos (hemólisis) producida por la acción de una enzima llamada hemolisina.

Podemos diferenciar tres tipos de hemólisis:

 Hemólisis alfa: es una hemólisis parcial y la zona de crecimiento aparece rodeada de un halo de color verdoso.

Hemólisis beta: en este caso la hemólisis es total y el halo que rodea a las colonias es totalmente transparente.

Hemólisis gamma (no hemólisis): el microorganismo en cuestión no es capaz de realizar la hemólisis y por tanto no existe halo alrededor de la colonia.

Caso clínico – Cálculos Renales

Compartimos un caso que nos hizo llegar  el químico Daniel Arias López , agradecemos mucho su aporte.

Paciente refiere haber arrojado cálculos renales, el químico se dio a la tarea de investigar su origen y se encontró con lo siguiente:

Cálculos renales de Weddellita (oxalato de calcio dihidratado). Fotografías realizadas con luz ordinaria y luz polarizada.

Daudon et. al(2012), mencionan que los cálculos de Weddellita del tipo II grupo A, presentan superficie espiculada, la cual esta compuesta por agregados de cristales bipiramidales con ángulos y bordes afilados, cuyo color es amarillo pardo.

De la misma manera, es importante señalar que todo esto se origina a partir de una agregación cristalina, la cual es producida por la atracción electrostática que va en función con la carga de la superficie de los cristales, entre mayor sea esa fuerza de unión más complejo será el agregado, por lo que con el tiempo dará origen a una aglomeración cristalina, hasta concluir con la formación del cálculo.

 

Referencias:

Michael Daudon, Oliver traxer & Paul Jungers. Lithiase Urinaire. 2° edición, Editorial Lavoisier (Medicine Sciences Publications). 2012 Paris, Francia. Pag. 59

Parasitosis

Parásito

Es un organismo que vive sobre un organismo huésped o en su interior y se alimenta a expensas del huésped.

Hay tres clases importantes de parásitos que pueden provocar enfermedades en los seres humanos:

  • Protozoos
  • Helmintos
  • Ectoparasitos

Protozoos

Son organismos unicelulares microscópicos que pueden ser de vida libre o de naturaleza parasiatria.

La transmisión de protozoos que viven en el intestino humano a otro ser humano generalmente ocurre por la vía fecal-oral (por ejemplo, alimentos o agua contaminados o contactos de persona a persona).

Los protozoos que viven en la sangre o tejidos humanos se transmiten a otros seres humanos mediante un artrópodo vector (por ejemplo, por la picadura de un mosquito o jején).

Los protozoos infecciosos para los seres humanos pueden clasificarse en cuatro grupos según su modo de movimiento:

  1. Sarcodinos, amebas, p. ej. Entamoeba
  2. Mastigóforos o flagelados, p. ej., Giardia, Leishmania
  3. Cilióforos o ciliados, p. ej., Balantidium
  4. Esporozoos, organismos cuya etapa adulta no es móvil, p. ej. Plasmodium, Cryptosporidium.

Características generales

  • Organismos unicelulares eucarióticos.
  • La clasificación tradicional, se basa en las estructuras de locomoción.
  • Su tamaño oscila entre 2-200 µm.
  • Presentan núcleo(s), diversos organelos y citoesqueleto.
  • La mayor parte son móviles y heterótrofos
  • Su reproducción, asexual o sexual, puede ser sencilla 8division binaria) o compleja (esquizogonia, merogonia, gametogonia, esporogonia).

 

Phylum Sarcomatigophora:

Subphylum Mastigophora

Utilizan flagelos como medio de locomoción, cada uno de ellos esta formado por un filamento (axonema).

Subphylum Sarcodina

Emiten diferentes tipos de seudópodoscomo medio de locomoción, lo cual les da la forma “ameboidea”. Presentan uno o varios núcleos en los diferentes estadios de vida. El ejemplo representativo es Entamoeba histolytica.

 

Phylum Ciliopora

Los ciliados poseen dos calses de núcleos: macronucleo (poliploide), implicado en la reproducción de RNA mensajero y mocronucleo (diploide), relacionado con la reproducción sexual. El movimiento de los organismos incluidos en este grupo es mediante cilios, son los mismos componentes proteicos que los flagelos. Se reconoce a Balantidium coli como patógeno para el humano.

Phylum Apicomplexa

Se han nombrado, a la fecha, mas de 6,000 apicomplexos, pero los datos obtenidos de muestras ambientales sugieren que puede haber millones de especies dentro de este phylum.

Estos organismos se caracterizan por la presencia de un complejo apical, compuesto por micronemas, roptrias, 1 o 2 anillos polares electrodensos y, en algunas especies, un conoide dentro de los anillos. La estructura general de un apicomplexo varía entre los diferentes grupos. Las formas móviles se desplazan por deslizamiento, aunque se contemplan otros mecanismos.

Sus ciclos de vida son complejos y contemplan reproducción asexual (esquizogonia, merogonia) y asexual (gametogonia). Los esporozoítos, forma infectiva, penetran en las células hospederas, sufren cambios y se reproducen en la forma de merozoitos, algunos de los cuales se transforman en células sexuales, los gametocitos, y pasan finalmente por una fase de esporogonia, que da lugar a las formas infectantes.

Algunos miembros del phylum requieren de un hospedero intermediario (entre ellos, Plasmodium, Taxoplasma Babesia, Theileria), y otros mantiene un estilo de vida monoxeno, con estadios de desarrollo asexual y sexual en un solo hospedero (ejemplos: Toxoplasma e Eimeria).

 

 

Reino Chromista, Subphylum Opalinata

Dentro de la calse de Blastocystea, se incluye a Blastocystis sp.

Protozoos no patógenos

En la lista del CDC, se contemplan:

  • Chilomastix mesnili
  • Endolimax nana
  • Entamoeba coli
  • Entamoeba dispar
  • Entamoeba hartmanni
  • Entamoeba polecki
  • Lodamoeba bütschlii

Nota: cabe señalar que estos microorganismos pueden generar infecciones en pacientes en condiciones de inmunosupresión, por lo que deben de tomarse en cuenta cuando se encuentra la presencia de los mismos y además se presenta sintomatología

Helmintos

Son organismos grandes por lo general se observan a simple vista cuando son adultos, pueden ser de vida libre o de naturaleza parasitaria.

En su forma adulta, los helmintos no pueden multiplicarse en los seres humanos. Hay tres grupos importantes de helmintos (helminto deriva de la palabra griega para “gusano”) que son parásitos humanos:

  • Gusanos planos (platelmintos): incluye los trematodos (duelas) y cestodos (tenias).
  • Gusanos de cabeza espinosa (acantocéfalos): las formas adultas de estos gusanos residen en el tracto gastrointestinal.
  • Gusano cilíndrico (nematodos): las formas adultas de estos gusanos pueden residir en el tracto gastrointestinal, la sangre, el sistema linfático o tejidos subcutáneos.

Ectoparásitos

Pueden incluir en un sentido amplio a los artrópodos hematófagos, como los mosquitos (porque dependen de la sangre de un huésped humano para alimentarse y sobrevivir), este término suele tener un sentido mas restringido que se refiere a organismos como garrapatas, pulgas, piojos y ácaros.

Los artrópodos son de por si causantes importantes de enfermedades, pero son aun mas importantes como vectores o transmisores de muchos patógenos diferentes que, a su vez, producen una enorme morbilidad y mortalidad por las enfermedades que provocan.

Medios de cultivo

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el din de identificarlas y realizar estudios complementarios.

Clasificación

Pueden clasificarse según su:

  • Consistencia
  • Origen
  • Composición
  • Utilización

Consistencia

  • Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias con la capacidad de mantener estables un pH, entre ellos podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo peptona.
  • Solidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se obtiene de algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un medio sólido, nos facilita obtener colonias bacterianas aisladas.
  • Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a estos se les disminuye la cantidad de agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la observación y registro de bacterias móviles.

Origen

Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios sintéticos y medios naturales.

  • Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios compuestos por productos químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios metabólicos, por ejemplo: agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.
  • Los medios naturales o químicamente no definidos son aquellos medios que se preparan a partir de sustancias naturales animales o vegetales, por ejemplo: suero, leche, papa, etc.

Composición y utilización

Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden clasificar en:

  • Simples
  • Enriquecidos
  • Selectivos
  • Diferenciales
  • Enriquecimiento

 

  1. Medios Simples
  • Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano general, ejemplos: agar nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.

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  1. Medios enriquecidos
  • Son medios simples o comunes, a los que se le añaden ciertos elementos como sangre, suero, líquido ascítico, huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el aporte de factores de crecimiento o sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en bacterias exigentes nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar sangre, medio de Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para facilitar el crecimiento de Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa (DLA), enriquecido con lactosa y desoxicolato.

 

 

  1. Medios selectivos
  • Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una alteración de las condiciones físicas del medio, entre algunos ejemplos tenemos
  • El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
  • Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee antibióticos como la vancomicina colistina y nistatina.
  • Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el crecimiento de bacterias gran positivas.
  • Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para Mycobacterium.

  1. Medios diferenciales
  • A estos medios se le adiciona sustancias para que solo crezcan ciertas bacterias y estas, al actuar sobre alguna de las sustancias adicionadas, permiten observar macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento que ayudan a diferenciar sus colonas de otras especies diferentes, entre algunos ejemplos encontramos:
  • Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color verde metálico brillante) de colonias de Enterobacter aerogenes (color rosado, consistencia mucosa y crecimiento abundante).
  • Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus pyogenes en Streptococcus betahemolíticos de Streptococcus alfa hemolítico y gama hemolítica.
  • Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite diferenciar las colonias de bacterias fermentadoras de este disacárido.

  1. Medios de enriquecimiento
  • Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las bacterias cuando la muestra obtenida es muy pobre, por ejemplo:
  • Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.
  • Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.
  • Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del género Salmonella.
  • Caldo o agua peptonada se utiliza para el crecimenot de Vibrio Cholerade.

Celularidad del tracto urinario

¿Sabías qué en un examen general de orina es necesario reportar y hacer la diferenciación de la celularidad de acuerdo a su epitelio de origen?
A continuación, haremos una breve descripción de algunos epitelios que conforman el tracto urinario, con el fin de aprender o reafirmar la morfología celular que se puede observar al revisar un sedimento urinario.
De manera muy general el el sistema urinario esta conformado por tres epitelios:
Epitelio plano estratificado, epitelio transicional (urotelio), epitelio tubular renal, estos a su ves se dividen en células superficiales, intermedias y basales
1.- Epitelio plano estratificado.
Constituye el tracto urinario en la fosa navicular de la uretra femenina y masculina, su presencia en el sedimento urinario se considera normal (siempre y cuando este no presente alguna anormalidad en su morfología), en general son las células mas comunes y que con mayor frecuencia se pueden encontrar en un sedimento urinario de un paciente sano.
2.- Epitelio transicional (urotelio)
Es el epitelio más distribuido en el tracto urinario, se encuentra presente desde cálices renales, uréteres, vejiga y uretra anterior.
Las células de urotelio&ie pueden encontrarse en procesos infecciosos inflamatorios del tracto urinario, hidronefrosis, litiasis Y renal, procesos degenerativos, procesos de sondaje e irrigación de vías urinarias, etc.
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La presencia de una célula porque tampoco puede considerarse normal, en niños y ancianos la casa de intercambio del urotelio es mayor Y por eso se suele ver más frecuentemente.
Superficiales
  • Mide de 60-80 micras.
  • Células planas, citoplasma extenso y granular.
  • Presentan dos o tres núcleos (membrana nuclear gruesa, contenido granular y nucléolos).

Intermedias

  • Mide de 30-50 micras.
  • Células planas, citoplasmas extenso y granular.
  • Presentan un núcleo (membrana nuclear gruesa, contenido granular y nucléolos).

Basales

  • Mide de 15-20 micras.
  • Núcleo oval con membrana gruesa.
  • Presencia de nucléolo.
  • Citoplasma escaso con prolongación caudal o en ocasiones puede tratarse de células redondas.

Entamoeba hystolitica vs. Entamoeba dispar

Continuando con los resultados del laboratorio que mal redactados o mal interpretados pueden llevar al uso  inadecuado de antibióticos, tenemos el caso del estudio de “amiba en fresco”. Cuántas veces no he visto administrar Metronidazol a diestra y siniestra por un reporte de “quistes de Entamoeba histolytica

Comparto la siguiente información con la finalidad de disminuir el uso indiscriminado de antiparasitarios como el Metronidazol por parte de los médicos, que al ver un reporte con un parásito patógeno como Entamoeba histolytica aunque no sea en su forma incisivamente administrar un antiparasitario.

La Entamoeba histolytica, agente etiológico de la amibiasis intestinal, descrita en 1875 por el médico Ruso Fedor Lösch, denominada en 1903 por el zoólogo alemán Fritz Schaudinn Entamoeba histolytica.

En el año 1925 Emil Brumpt parasitólogo francés describió una especie de Entamoeba similar morfológicamente a Entamoeba histolytica, y la denomina Entamoeba dispar, considerándola comensal y no patógena.

La Organización Mundial de la salud en 1997 reconoce que la diferenciación ha sido universalmente aceptada y recomienda el reportar el hallazgo de quistes y/o trofozoitos como Entamoeba histolytica/ Entamoeba dispar, de esta manera quedará a criterio del médico correlacionar con la clínica del paciente para determinar si es más probable que se esté ante una Entamoeba patógena (histolytica) o no patógena (dispar).

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Al realizar la identificación de quistes y/o trofozoitos no invasivos, microscópicamente es imposible distinguir ambos parásitos y por lo tanto, el laboratorio debe informar:

Quistes y/o trofozoitos de Entamoeba histolytica/ Entamoeba dispar.

La identificación de trofozoítos con eritrocitos ingeridos en muestras de heces o trofozoitos en secciones de tejidos, es indicativo de enfermedad invasiva. En este caso el laboratorio debe informar:

Trofozoitos de Entamoeba histolytica (trofozoitos invasores)

Referencia: World Health Organization. Entamoeba taxonomy. Bulletin of World Healt Organization 1997; 75: 291-292

 

Resistencia bacteriana

Resistencia bacteriana

Entrevista con el QFB Daniel R. – Tema: Resistencia bacteriana

El maestro Daniel Romero nos habla sobre la resistencia bacteriana, un tema que en la actualidad tiene mucha relevancia ya que es preocupante que los antibióticos no están funcionando como lo hacían.

¿Qué lo causa?¿Cómo se da tal fenómeno? ¿Qué qué papel desempeña el profesional de laboratorio delante de este problema?¿Qué se puede hacer para combatir esta problemática?

Son algunas de las preguntas que se estarán respondiendo en esta charla , te invitamos a que veas esta entrevista. Estamos seguros te será de ayuda.

 

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